猪链球菌2型MRP和EF双基因共表达重组腺病毒载体的构建

作     者：汪涛 余辉 梅钧 李兴暖 周小鸥 赵志军 

作者机构：九江学院基础医学院病原生物学教研室九江332000 江西省系统生物学临床应用重点实验室九江332000 宁夏医科大学总医院医学实验中心银川750004 

基　　金：江西省教育厅科技项目(GJJ12624) 九江学院博士科研启动项目(8870909) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2013年第29卷第8期

页      码：130-134页

摘      要：旨在构建猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)和胞外因子(EF)双基因共表达重组腺病毒载体。根据猪链球菌2型MRP和EF的基因序列设计合成2对引物,以猪链球菌2型基因组为模板,扩增MRP基因(第1 801-2 513位)和EF基因(第1 783-2 563位)序列,并克隆到pMD18-T载体。然后将MRP基因、IRES元件和EF基因依次定向克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-MRP-IRES-EF,再经PmeⅠ酶切,然后转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183-AD-1感受态细胞中,经同源重组获得重组腺病毒载体质粒rAdeno-CMV-MRP-IRES-EF。PacⅠ酶切线性化该重组腺病毒载体质粒,再转染AD-293细胞进行病毒包装,最后对细胞包装的病毒液进行PCR鉴定。结果表明,克隆的MRP和EF基因测序正确,酶切重组穿梭质粒和腺病毒载体质粒得到特异酶切产物;线性化的重组腺病毒载体质粒rAdeno-CMV-MRP-IRES-EF转染AD-293细胞6 d后也出现明显的细胞病变(CPE),在培养细胞的上清病毒液中也检测到了MRP和EF基因片段。

主 题 词：猪链球菌2型 溶菌酶释放蛋白 胞外因子 双基因共表达 重组腺病毒载体 

学科分类：090601[090601] 1001[医学-基础医学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 10[医学] 

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2013.08.018

馆 藏 号：203781301...