抗人红细胞血型A抗原单链抗体原核表达及活性测定

作     者：王长军 唐家琪 李先富 潘秀珍 操敏 

作者机构：南京军区军事医学研究所江苏南京210002 

基　　金：国家自然科学基金资助 No.39670645 "九五"全军医药科研基金资助 No.96M025 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2001年第17卷第3期

页      码：271-273页

摘      要：目的构建并表达抗人红细胞血型A抗原单链小分子抗体(single-chainFv)蛋白。方法设计合成抗重、轻链可变区引物,通过重叠延伸拼接PCR技术,在50AmAbV和VL基因间引入连结短肽,体外构建50AScFv基因并进行序列分析;将其克隆入表达载体pET-28a中,在大肠杆菌中诱导表达;并以免疫印迹测定重组蛋白的生物学活性。结果序列分析表明,50AScFv基因全长747bp,编码249个氨基酸;重组体表达产物聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为29000左右,与预期的结果一致,表达产物主要以不溶性包涵体形式存在;光密度扫描结果表明,重组蛋白占菌体总蛋白的16.2%,免疫印迹试验显示,重组小分子抗体保留了亲本mAb的特异性和力。结论成功地构建50AScFv基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为进一步研制基因工程血型检定抗体奠定了基础。

主 题 词：ABO血型系统 基因工程抗体 半链抗体表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 1001[医学-基础医学] 08[工学] 09[农学] 100102[100102] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1007-8738.2001.03.026

馆 藏 号：203781699...