新疆肉用绵羊颗粒细胞抑制素βA基因RNAi载体的构建及其干扰效率验证

作     者：林杉 陈宝麒 田占伟 刘贤侠 杨华 赵宗胜 LIN Shan;CHEN Bao-qi;TIAN Zhan-wei;LIU Xin-xia;YAN Hua;ZHAO Zong-sheng

作者机构：石河子大学生命科学学院新疆石河子832003 石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 新疆农垦科学院新疆石河子832003 

基　　金：新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室开放课题基金资助项目(2011KLS06) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2015年第35卷第8期

页      码：1345-1352页

摘      要：抑制素βA基因(inhibin-βA,INHβA)的表达与绵羊(Ovis aries)的产羔数有一定关系。为了观察INHβA对绵羊发情性状的影响以及在目的基因沉默后,引起的发情性状相关激素变化的情况,本研究利用RNAi技术构建载体干扰INHβA的表达。根据GenBank上绵羊INHβA(GenBank:NW_004080167.1)mRNA的序列设计干扰片段,通过酶切和测序验证,成功构建了4个INHβA基因RNAi质粒载体PLLU2G-shINHβA-1(I-1)、PLLU2G-shINHβA-2(I-2)、PLLU2G-shINHβA-3(I-3)、PLLU2G-shINHβA-4(I-4)和1个空载体(赛亚公司的PLLU2G)阴性对照;在成功分离卵巢颗粒细胞并建立培养体系后,利用Lip2000介导干扰载体转染细胞,通过荧光定量RT-PCR检测干扰前后INHβA的表达量。结果显示,4个干扰载体的干扰效率依次为34%,58%,39%,19%,其中I-2对INHβA表达的沉默效果最好。通过卵巢注射干扰载体I-2,检测干扰后绵羊血清INHβA、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二酮(E2)的含量。结果显示,注射干扰载体后INHβA和FSH分别呈现明显的下降和上升波峰,而血清中LH和E2水平没有发生明显变化。

主 题 词：抑制素βA基因(INHβA) 绵羊 RNA干扰(RNAi) 卵巢颗粒细胞 

学科分类：08[工学] 0905[农学-林学类] 09[农学] 0836[0836] 090501[090501] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2015.08.27

馆 藏 号：203782262...