7种鼠传病原体多重PCR检测方法的建立与应用

作     者：康央 宋秀平 张燕君 刘起勇 栗冬梅 KANG Yang;SONG Xiu-ping;ZHANG Yan-jun;LIU Qi-yong;LI Dong-mei

作者机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病预防控制国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心北京102206 山东大学生命科学学院山东青岛266237 

基　　金：国家科技重大专项(2017ZX10303404) 

出 版 物：《中国媒介生物学及控制杂志》 (Chinese Journal of Vector Biology and Control)

年 卷 期：2019年第30卷第5期

页      码：487-493页

摘      要：目的应用QIAxcel毛细管电泳系统建立一种能够同时检测7种鼠传病原体的多重PCR检测方法。方法应用微生物数据分析云平台(https://***/)中 special marker gene 工作流,筛选恙虫病东方体、嗜吞噬细胞无形体、莫氏立克次体、土拉弗朗西斯菌、贝氏柯克斯体、问号钩端螺旋体和巴尔通体特异基因,据此设计引物。根据温度转换PCR原理构建特异性嵌合引物,建立多重PCR反应体系,应用QIAxcel毛细管电泳系统对扩增产物进行检测,评价该体系灵敏度、特异性和可重复性。通过对模拟样品和野外样品进行检测,评价该方法对样品的检测能力。结果特异性检测显示,每种病原体扩增均只出现单一目的条带,无交叉反应;多引物单模板灵敏度检测限为11~76拷贝/μl,多引物多模板灵敏度检测限为20~200拷贝/μl。经样品检测显示,多重PCR法检测能力与单重实时荧光定量PCR法相当,优于普通单重PCR法。结论运用QIAxcel毛细管电泳系统成功建立鼠传病原体多重PCR检测方法,可同时高效、快速检出7种病原体,为相关鼠传疾病的诊断、监测和流行病学调查提供有效手段。

主 题 词：鼠传病原体 多重PCR 毛细管电泳 温度转换PCR 人兽共患病 

学科分类：100208[100208] 1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.11853/j.issn.1003.8280.2019.05.002

馆 藏 号：203786525...