人肝细胞中FⅧ基因5＇端CpG岛甲基化状态的研究

作     者：何玉霞 周云飞 王娟 代晓璐 张军 He Yuxia;Zhou Yunfei;Wang Juan;Dai Xiaolu;Zhang Jun

作者机构：重庆医科大学基础医学院重庆400016 

基　　金：国家自然科学基金项目(20803098) 重庆市教委科研项目(KJ080301)共同资助 

出 版 物：《基因组学与应用生物学》 (Genomics and Applied Biology)

年 卷 期：2015年第34卷第8期

页      码：1600-1605页

摘      要：本实验通过建立稳定的重亚硫酸盐测序(bisulfite-sequencing PCR,BSP)检测平台,研究人类永生化肝细胞LO2与人肝组织细胞中凝血因子Ⅷ(coagulation factorⅧ,FⅧ)基因5 端Cp G岛的甲基化状态及该Cp G岛的甲基化在FⅧ表达调节中的作用。运用RT-PCR、Western-blot检测FⅧ在LO2细胞与人肝组织中的转录及表达,Methprimer软件预测FⅧ基因5 端Cp G岛并设计BSP引物,BSP联合TA克隆及质粒PCR各验证十个阳性单克隆送测序,QUMA软件对测序结果进行甲基化位点分析,以(甲基化CG位点个数)/(甲基化CG位点个数+非甲基化位点个数)计算甲基化率。结果显示,新鲜分离的人肝组织细胞能够稳定表达FⅧ,LO2细胞不能表达;FⅧ基因5 端存在一个278 bp的Cp G岛,LO2细胞中该Cp G岛的甲基化率为93.48%,正常人肝组织中该Cp G岛的甲基化率为93.91%。本实验成功建立稳定的BSP检测平台,并发现在LO2细胞与人肝组织中,FⅧ基因5 端均存在一个被高度甲基化的Cp G岛,人肝组织中FⅧ基因5 端Cp G岛的甲基化可能参与维持体内FⅧ的低水平表达。

主 题 词：FⅧ基因 甲基化率 BSP CpG岛 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13417/j.gab.034.001600

馆 藏 号：203786894...