粉尘螨第十六类变应原的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

作     者：李维中 王月明 吴莹莹 邬玉兰 刘志刚 LI Wei-zhong;WANG Yue-ming;WU Ying-ying;WU Yu-lan;LIU Zhi-gang

作者机构：深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所广东深圳518060 南昌大学医学院免疫教研室南昌330006 蚌埠医学院研究生院2011级安徽蚌埠233000 

基　　金：国家自然科学基金(81071388) 广东省自然科学基金(04554) 广东省高等学校国际暨港澳台科技合作创新平台项目(2012gjhz0009) 深圳市重点实验室组建项目(SW201110010) 深圳市科技计划基础研究重点项目(JCYJ20120613100657482) 

出 版 物：《南昌大学学报（医学版）》 (Journal of Nanchang University：Medical Sciences)

年 卷 期：2013年第53卷第12期

页      码：7-10,15页

摘      要：目的获得大量具有良好IgE结合活性的粉尘螨第十六类变应原(Der f16)的重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究。方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,根据已知Der f16基因序列设计引物,经RT-PCR扩增Der f16基因片段,产物连入pMD32-T载体中。扩增后,利用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切将目的基因片段连接到pET32a表达载体上,转化到大肠杆菌(*** BL21)中经IPTG诱导表达。表达载体经亲和层析纯化,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western bolt检测变应原免疫学活性。结果以粉尘螨总RNA为模板成功克隆出Der f16基因,与数据库中Der f16基因同源性为100%;经IPTG诱导后,大肠杆菌大量表达Der f16蛋白,所获得的重组蛋白分子质量为73ku,上清及沉淀物均有蛋白表达,且上清表达量高于沉淀物。重组Der f16能够与螨过敏患者血清中的IgE反应,而不与健康者血清中的IgE反应。结论成功构建了Der f16的原核表达载体,并高效表达和纯化出具有免疫原性的Der f16重组蛋白。

主 题 词：粉尘螨 Derf16 克隆 表达 纯化 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

馆 藏 号：203787369...