基于酶学-细胞水平的IDO1抑制剂筛选模型建立与优化

作     者：来芳芳 薛妮娜 季鸣 杜婷婷 李凌 盛莉 陈晓光 LAI Fang-fang;XUE Ni-na;JI Ming;DU Ting-ting;LI Ling;SHENG Li;CHEN Xiao-guang

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室/创新药物非临床药物代谢及PK/PD研究北京市重点实验室 

基　　金：十三五国家重大新药创制科技重大专项(2018ZX09711001-003) 

出 版 物：《药学学报》 (Acta Pharmaceutica Sinica)

年 卷 期：2019年第54卷第10期

页      码：1868-1874页

摘      要：本研究以肿瘤免疫治疗相关蛋白吲哚胺2,3-双加氧酶1 (indoleamine 2,3-dioxygenase 1, IDO1)为靶点,提出并设计构建了基于酶学-细胞水平的IDO1抑制剂筛选模型并进行了体内验证。首先采用基因工程手段表达纯化重组人IDO1蛋白并建立简单高效的IDO酶学筛选体系;其次通过干扰素γ(interferon-γ, IFNγ)刺激A172细胞或者构建高表达人IDO1蛋白的质粒瞬时转染HEK293细胞构建特异性的IDO1细胞水平筛选体系;最后在C57小鼠通过LC/MS/MS方法检测小鼠血浆中犬尿氨酸和色氨酸的含量和比值,从体内进一步验证筛选得到的化合物对IDO酶的抑制作用。本研究中建立和优化的酶学、细胞水平的筛选模型再结合体内的验证方法能高效、通量、特异性筛选到真正体内有效的IDO1抑制剂,为新药的快速研发奠定了良好的基础。动物实验均严格遵循中国医学科学院药物研究所动物实验中心标准操作规程,尽量减少实验对动物造成的伤害。

主 题 词：高通量 系统筛选模型 吲哚胺2,3-双加氧酶1 抑制剂 肿瘤免疫 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.16438/j.0513-4870.2019-0697

馆 藏 号：203791843...