实时逆转录聚合酶链反应定量检测人TNF-α mRNA的表达

作     者：郑晓群 吕建新 

作者机构：浙江省温州医学院附属二院325027 温州医学院检验医学院细胞与分子医学研究所 

基　　金：浙江省医药卫生科研基金项目(2003B119) 

出 版 物：《医学研究通讯》 (Bulletin of Medical Research)

年 卷 期：2005年第34卷第10期

页      码：31-33页

摘      要：目的建立一种快速、灵敏、特异定量检测人外周血单个核细胞(PBMC)表达 TNF-α mRNA 的方法。方法根据 Gene Bank 中 TNF-α mRNA 序列和 MGB 探针荧光定量分析原理,设计合成特异的引物和探针,优化实验条件,建立定量检测人 TNF-α mRNA 的实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,并对10名健康体检者 PBMC PHA 刺激前后进行 TNF-α表达检测。结果本法灵敏度为10~3拷贝/毫升、线性检测范围达6个数量级(10~3～10~9拷贝/毫升);特异性好,PCR 产物电泳后无非特异性条带产生,非目的扩增产物用本法进行检测,均无荧光信号响应;以 Ct 值计算变异系数(CV 值),批内批间 CV值均小于5%;10名健康体检者 PBMC PHA 刺激前后 TNF-α mRNA 的平均含量分别为10^(4.15±0.49)和10^(5.19±0.43)拷贝/毫升。结论Taqman-MGB 实时荧光 RT-PCR 定量检测人 TNF-α mRNA 表达水平,结果快速、准确、特异、灵敏,具有临床推广价值。

主 题 词：肿瘤坏死因子-α 实时PCR 逆转录 RNA 信使 荧光定量分析 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203793557...