SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因方法的建立
作者机构：广西大学动物科学技术学院南宁530005 广西兽医研究所南宁530001
基 金：国家百千万人才工程入选专项资金项目(945200603) 广西科学基金项目(桂科自0991222) 广西留学回国人员基金项目(桂科回0832019 0639016)
出 版 物：《广西农业科学》 (Guangxi Agricultural Sciences)
年 卷 期：2010年第41卷第4期
页 码：366-370页
摘 要：为建立一种定量检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法,针对δC、δNS基因分别设计了1对特异性引物,同时选择了1对内参基因β-actin引物,将常规PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,梯度倍比稀释作为标准品,用于构建SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测δC、δNS基因及内参基因β-actin的标准曲线。结果表明,建立的标准曲线具有良好的线性关系,R2均在0.99以上;最小检出量为10拷贝/μL的阳性标准品,且具有良好的重复性,能够校正抽提样品中细胞数量不均带来的差异。可见,SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法能满足检测微量样品中禽呼肠孤病毒δC和δNS基因表达的要求,具有快速、敏感性高、重复性好等特点。
主 题 词：禽呼肠孤病毒 δC基因 δNS基因 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT—PCR 相对定量
学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类]
D O I：10.3969/j.issn.2095-1191.2010.04.020
馆 藏 号：203795100...
