通过融合表达COMP48自折叠肽提高纳米抗体与CD47抗原的亲和力

作     者：张琪 秦瑞坪 范利华 马晓玲 李江伟 Zhang Qi;Qin Ruiping;Fan Lihua;Ma Xiaoling;Li Jiangwei

作者机构：新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046 伊犁师范学院生物与地理科学学院伊宁835000 乌鲁木齐恒康致远生物技术有限公司830011 

基　　金：国家自然科学基金(31570935) 

出 版 物：《国际生物医学工程杂志》 (International Journal of Biomedical Engineering)

年 卷 期：2019年第42卷第4期

页      码：288-293页

摘      要：目的利用自折叠肽人软骨寡聚基质蛋白(COMP48)改造CD47纳米抗体,以提高其与CD47抗原的亲和力.方法设计和合成COMP48与CD47纳米抗体(VHHB1)DNA的融合序列,构建重组质粒pET22b-VHHB1-COMP48,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达融合蛋白.采用蛋白质印迹法、间接酶联免疫吸附测定(ELISA)和非竞争ELISA法检测融合蛋白和抗原CD47的结合特异性和亲和力.结果采用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导得到重组蛋白VHHB1-COMP48,经固定化金属离子亲和层析纯化后得到纯度为90%的重组蛋白.蛋白质印迹结果显示,重组蛋白VHHB1-COMP48可特异性结合抗原CD47,但不结合无关蛋白.间接ELISA和非竞争ELISA结果显示,偶联COMP48的纳米抗体VHHB1-COMP48与未偶联的纳米抗体VHHB1相比亲和力增加,差异具有统计学意义(P<0.01).通过非竞争ELISA测得融合COMP48的纳米抗体的结合常数为6.97×10^7L/mol,解离常数为1.434×10^-8 mol/L.结论在纳米抗体后偶联COMP48可提高纳米抗体与抗原的亲和力.

主 题 词：纳米抗体 人软骨寡聚基质蛋白 亲和力成熟 自折叠肽 CD47 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1673-4181.2019.04.002

馆 藏 号：203795809...