实时荧光定量PCR检测人胰岛素样生长因子及其受体基因的方法学构建

作     者：彭启松 张俊 罗光华 PENG Qi-song;ZHANG Jun;LUO Guang-hua

作者机构：南京市江宁医院检验科南京211100 苏州大学附属第三医院综合实验室江苏常州213003 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2014年第32卷第5期

页      码：358-361页

摘      要：目的建立检测人胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor-1,IGF-1）、IGF-1受体（IGF-1R）、胰岛素样生长因子2（IGF-2）及IGF-2受体（IGF-2R）基因的实时荧光定量PCR。方法设计并合成检测上述4种基因的引物及TaqMan探针;提取胎盘组织RNA并逆转录为cDNA,分别将扩增的4种基因片段纯化后与质粒载体连接,克隆构建含目的基因片段的重组质粒,分别作为定量检测上述4种基因的标准品;用建立的实时荧光定量PCR检测上述4种基因,并用测序验证。结果 PCR扩增产物经测序分析证实分别为上述4种基因的特异性片段;定量检测IGF-1、IGF-1R、IGF-2及IGF-2R的线性范围分别为1.00×10^2-1.00×10^8copies/μL、2.00×10^2-2.00×10^8copies/μL、3.00×10^2-3.00×10^8copies/μL及5.00×10^2-5.00×10^8copies/μL;相关系数（r）分别为0.994、0.993、0.995及0.996;扩增效率分别为92.35%、96.06%、94.92%及98.84%;批间变异系数（CV）分别为1.64%-2.83%、1.73%-1.98%、2.47%-4.09%及2.25%-2.52%;批内CV分别为1.36%、1.02%、1.04%及0.96%。结论建立了高度敏感、特异检测人IGF及其受体的实时荧光定量PCR法。

主 题 词：胰岛素样生长因子 受体 实时荧光定量聚合酶链反应 TaqMan探针 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13602/j.cnki.jcls.2014.05.10

馆 藏 号：203796968...