猪流行性腹泻病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立与应用

作     者：李彬 刘浩飞 孙冰 茅爱华 杜露平 何孔旺 郭容利 温立斌 张雪寒 倪艳秀 周俊明 吕立新 俞正玉 王小敏 胡屹屹 祝昊丹 于洋 

作者机构：江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 

基　　金：江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(13)3069] 

出 版 物：《江苏农业学报》 (Jiangsu Journal of Agricultural Sciences)

年 卷 期：2014年第30卷第1期

页      码：125-129页

摘      要：为定量检测猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）,建立了检测PEDV的TaqMan荧光定量PCR方法.根据PEDV基因组中保守的N基因序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有N基因的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应.结果表明,该试验建立的荧光定量PCR方法在1μl 10^1 ～ 10^9拷贝之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.99以上,扩增效率在90％与100％之间.该方法的检测灵敏度为10拷贝,与常规RT-PCR方法相比,该方法敏感性更高,而且该检测方法特异性较好,与猪的其他病毒核酸均无交叉反应,批内和批间的变异系数均低于3％,表明该方法的重复性较好.对华东地区采集的130份临床样品进行检测,结果显示,PEDV的阳性率为63.1％.

主 题 词：猪流行性腹泻病毒 TaqMan 荧光定量 PCR 流行病学调查 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-4440.2014.01.021

馆 藏 号：203796975...