人细胞表面黏附分子P选择素启动子报告基因的构建及鉴定

作     者：徐若霆 周辉 刘玮璐 吴炜 刘鲜艳 张文强 谭洁 赵明 XU Ruoting;ZHOU Hui;LIU Weilu;WU Wei;LIU Xianyan;ZHANG Wenqiang;TAN Jie;ZHAO Ming

作者机构：南方医科大学病理生理学教研室//广东省医学休克微循环重点实验室广东广州510515 

基　　金：国家自然科学基金(81272095) 大学生创新创业训练计划项目(201512121268)~~ 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2016年第36卷第3期

页      码：332-338页

摘      要：目的构建人细胞表面黏附分子P选择素(p-selectin)基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-pselectin-promoter,检测其转录活性,并应用于筛选药物对其转录活性的影响。方法根据UCSC软件查找的人基因组DNA的p-selectin启动子序列并设计两端引物,扩增人基因组DNA中的p-selectin启动子。用限制性内切酶KpnⅠ和XhoⅠ双酶切质粒pGL3-Basic和p-selectin启动子后,将p-selectin基因启动子插入到pGL3-basic报告基因载体上。重组质粒命名为pGL3-pselectin-promoter。将其与内参质粒p RL-SV40瞬时共转染293F细胞,检测双荧光素酶活性。对不同启动子片段长度的p-selectin报告基因进行双荧光素酶的检测。以炎症因子和药物分组刺激转染了报告基因质粒的293F细胞并检测双荧光素酶活性。结果成功构建p-selectin基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-pselectin-promoter,质粒酶切及测序结果完全正确。瞬时共转染pGL3-pselectin-promoter/p RL-SV40组荧光素酶活性为0.8573±0.4703,高于转染pGL3-Basic/p RL-SV40组的荧光素酶活性值0.03955±0.05894。pGL3-1826 bp相比较于pGL3-1092 bp组和pGL3-3738 bp组具有最强的转录活性。炎症因子LPS和TNF-α和药物As2O3均具有上调pGL3-pselectin-promoter转录活性的作用。结论 pGL3-pselectin-promoter在293F细胞中能被转录激活,并验证了炎症因子对其转录表达的作用,并为药物筛选与评价提供解决方案。

主 题 词：细胞黏附分子类 P选择素 炎症反应 荧光素酶 

学科分类：100218[100218] 1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-4254.2016.03.07

馆 藏 号：203797841...