人RhoB基因真核表达载体的构建和表达分析

作     者：王梅林 牛精铃 金若其 徐莹莹 蔡晶晶 陈群力 WANG Mei-lin;NIU Jing-ling;JIN Ruo-qi;XU Ying-ying;CAI Jing-jing;CHEN Qun-li

作者机构：河南科技大学医学院 

基　　金：国家自然科学基金项目(31500631) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2019年第35卷第10期

页      码：174-179页

摘      要：旨在构建带Flag标签的人RhoB基因真核表达载体并检测其表达。提取人胚肾细胞HEK-293T总RNA并反转录获得cDNA;设计引物并利用PCR技术扩增RhoB基因的ORF序列;将所扩增序列插入到带Flag标签的pCMV5真核表达载体,插入位点位于限制性内切酶SalⅠ和XbaⅠ之间,得到真核表达载体Flag-RhoB。酶切并测序验证该质粒的准确性。将成功构建的Flag-RhoB质粒转染乳腺癌MCF7细胞、宫颈癌HeLa细胞以及结直肠癌HCT116细胞,Western Blotting检测RhoB蛋白的表达情况;转染***细胞,免疫荧光技术检测该蛋白在细胞中的定位情况。成功扩增出RhoB基因的ORF序列;连入pCMV5中获得真核表达质粒Flag-RhoB;酶切鉴定得到590 bp大小的片段,测序结果显示连入的是RhoB基因的cDNA序列与GenBank相符。Western Blotting结果显示,该质粒可在MCF7细胞、HeLa细胞及HCT116细胞中正确表达。免疫荧光实验显示过表达的RhoB蛋白主要定位于细胞膜上,细胞质中也有分布。成功构建了带Flag标签的人RhoB基因的真核表达载体,该质粒可在细胞中顺利表达。

主 题 词：RhoB 真核表达 免疫荧光 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0213

馆 藏 号：203801160...