人AFP启动子操控的跨膜型抗CD3单链抗体构建及其在AFP阳性肝癌细胞中特异性表达

作     者：祁麟 熊梦裳 林芳珍 卢杨 熊冬生 张砚君 范冬梅 张晴 QI Lin1];XIONG Mengshang;LIN Fangzhen;LU Yang;XIONG Dongsheng;ZHANG Yanjun;FAN Dongmei;ZHANG Qing

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所天津300020 国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81800189) 

出 版 物：《山东医药》 (Shandong Medical Journal)

年 卷 期：2019年第59卷第29期

页      码：1-4,I0001页

摘      要：目的设计肝癌特异性人甲胎蛋白启动子(hAFPp)操控的跨膜型抗CD3单链抗体(antiCD3scfv),使其仅在AFP阳性(AFP+)肝癌细胞中特异性表达。方法利用分子克隆技术构建pAd-hAFPp-CD3scfv腺病毒载体、pAd-hAFPp-antiCD3scfv穿梭质粒载体,经测序验证其基因序列的正确性。取AFP+人肝癌细胞HepG2、Huh-7及AFP阴性(AFP-)正常人肝细胞HL-7702、人乳腺癌细胞MCF-7,利用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定hAFPp的肝癌细胞转录特异性;通过Western blotting、免疫荧光、流式分析检测antiCD3scfv蛋白在细胞的表达、定位及表达效率。结果构建的pAd-hAFPp-CD3scfv腺病毒载体、pAd-hAFPp-antiCD3scfv穿梭质粒载体,经测序后基因序列正确。hAFPp在AFP+的HepG2、Huh-7细胞中转录活性分别为160.86%±26.24%、80.08%±12.64%,而在AFP-细胞中转录活性均90%,而HL-7702、MCF-7均无条带出现。结论携带antiCD3scfv蛋白基因的腺病毒感染周围细胞后,hAFPp调控antiCD3scfv在肝癌细胞的细胞膜特异性表达,进而可能实现antiCD3scfv分子直接介导免疫杀伤的抗肿瘤效果。

主 题 词：肝癌 肿瘤免疫治疗 抗CD3单链抗体 人甲胎蛋白启动子 

学科分类：0831[工学-公安技术类] 08[工学] 0836[0836] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-266X.2019.29.001

馆 藏 号：203801668...