南药益智ITS-PCR体系的建立与优化

作     者：高炳淼 潘坤 田建平 魏娜 张俊清 Gao Bingmiao;Pan Kun;Tian Jianping;Wei Na;Zhang Junqing

作者机构：海南医学院海南省热带药用植物研究开发重点实验室海口571199 

基　　金：海南省自然科学基金(814291) 海南医学院培育基金(HY2013-11) 海南医学院引进人才科研启动经费共同资助 

出 版 物：《基因组学与应用生物学》 (Genomics and Applied Biology)

年 卷 期：2015年第34卷第5期

页      码：1061-1066页

摘      要：为了建立适合南药益智的ITS-PCR体系来研究不同地理居群益智遗传多样性,本研究利用植物基因组试剂盒法提取益智基因组DNA为模板,采用单因素和正交试验对ITS-PCR过程中的关键影响因素进行优化,并对ITS-PCR产物进行测序鉴定。实验结果表明最佳ITS-PCR反应体系(25μL)为:Taq酶1.0 U,d NTPs 4 mmol/L,Mg2+0.5 mmol/L,引物2.0μmol/L,模板20 ng,10×PCR Buffer(不含Mg2+)2.5μL;最佳扩增程序为:94℃预变性2 min;94℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸1 min,共32个循环;最后72℃延伸5 min。采用该最佳体系对益智基因组DNA进行PCR扩增,获得扩增产物经单向测序获得了益智ITS部分序列。建立了稳定的ITS-PCR体系,为研究益智遗传多样性分析奠定了基础。

主 题 词：益智 ITS-PCR 体系优化 正交设计 

学科分类：1008[医学-中药学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13417/j.gab.034.001061

馆 藏 号：203802223...