三角褐指藻△^5-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达

作     者：杨哲 魏东盛 邢来君 李明春 Zhe Yang;Dongsheng Wei;Laijun Xing;Mingchun Li

作者机构：南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室天津300071 

基　　金：国家自然科学基金(No.30771355) 国家科技部"863"项目(No.2007AA10Z189) 教育部博士点基金新教师项目(No.20070055061)资助~~ 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2009年第25卷第2期

页      码：195-199页

摘      要：△5-脂肪酸脱氢酶是合成花生四烯酸的关键酶。根据已报道的△5-脂肪酸脱氢酶基因设计引物,分别从三角褐指藻基因组DNA和总cDNA中扩增得到1520 bp和1410 bp的特异片段,序列分析结果显示,结构基因中含有一个大小为110 bp的内含子,这是国内外首次报道。将△5-脂肪酸脱氢酶基因亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2.0中,在大肠杆菌中筛选到含有目的片段的重组质粒pYPTD5,用电击转化的方法将重组质粒pYPTD5转化到营养缺陷型酿酒酵母菌株INVSc1中,在缺省培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株YPTD5。在合适的培养条件下,添加外源底物双高γ-亚麻酸和诱导物半乳糖,培养并收集菌体。通过脂肪酸甲酯气相色谱分析,表明三角褐指藻△5-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效的表达,将双高γ-亚麻酸转化为花生四烯酸,其底物转化率达到了45.9%。

主 题 词：花生四烯酸 酿酒酵母 功能验证 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-3061.2009.02.006

馆 藏 号：203803377...