长双歧杆菌NCC2705高效转化系统的建立及GFP表达

作     者：刘大伟 孙忠科 郭燕红 黄留玉 袁静 LIU Da-Wei;SUN Zhong-Ke;GUO Yan-Hong;HUANG Liu-Yu;YUAN Jing

作者机构：军事医学科学院疾病预防控制所北京100071 

基　　金：国家高技术研究发展计划(2007AA02Z118) 国家自然科学基金(30771809) 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2010年第21卷第6期

页      码：808-811页

摘      要：目的:建立长双歧杆菌NCC2705高效稳定的电转化系统,并以其为宿主表达绿色荧光蛋白(GFP),构建一个稳定的带报告基因的表达载体。方法:从双歧杆菌克隆载体pDG7中切取其在双歧杆菌中复制所必需的pMB1复制子插入质粒pUC19的多克隆位点区,并将gfp基因在双歧杆菌中进行表达;设计双歧杆菌电击转化体系,研究在不同电击电压条件下的电转效率。结果:首先构建了大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭质粒pUB1和带有gfp基因的表达质粒pUB2,用电击法将之转化至双歧杆菌,当细菌生长到D600nm约为0.5时制备感受态细胞,在电容25μF、电阻200Ω、电压12.5 kV/cm的电击条件下进行完整质粒转化,可得到较高的转化率。结论:构建了以长双歧杆菌NCC2705为宿主的高效稳定的表达系统,为进一步研究益生菌的分子生物学和功能特性提供了基础。

主 题 词：长双歧杆菌NCC2705 质粒构建 电转化 绿色荧光蛋白 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2010.06.014

馆 藏 号：203803496...