TACE基因shRNA真核表达载体的构建及其对HeLa细胞生物学活性的影响

作     者：章杰 闫媛 杨渝珍 杨业金 

作者机构：华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系武汉430030 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No30500085) 

出 版 物：《华中科技大学学报（医学版）》 (Acta Medicinae Universitatis Scientiae et Technologiae Huazhong)

年 卷 期：2008年第37卷第4期

页      码：426-430页

摘      要：目的构建靶向肿瘤坏死因子转换酶（TACE）的小发夹结构RNA（shRNA）的真核表达载体,观察干扰TA-CE表达对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法设计针对TACE基因的4个shRNA序列,构建真核表达载体shR-NA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4。通过酶切和测序等方法进行鉴定。转染HeLa细胞后,用Realtime PCR的方法检测其对HeLa细胞TACE基因表达的影响;用ELISA检测细胞分泌的sTNF-α,间接反映干扰TACE的效果;用MTT法检测细胞增殖活性;用DNA ladder和流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建和筛选出了针对TACE基因的3个有效的特异性真核表达载体,且均在不同程度上抑制了HeLa细胞TACE基因的表达。ELISA检测结果与Realtime PCR实验结果相符。同时发现干扰TACE基因后,HeLa细胞的生长受到抑制,凋亡率升高,与对照组相比差异有显著性意义（P〈0.05）。实验组转染shRNA1~3后72h可见特征性的基因组DNA ladder条带。结论所构建的TACEshR-NA真核表达载体能显著抑制TACE的表达。干扰TACE基因的表达可有效抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡。

主 题 词：肿瘤坏死因子转换酶 小发夹结构RNA HeLa细胞 细胞凋亡 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3870/j.issn.1672-0741.2008.04.002

馆 藏 号：203803637...