昆虫细胞凋亡蛋白酶caspase-1的表达纯化及活性分析

作     者：曾宪东 宋建华 梁昌镛 陈新文 ZENG Xiandong;SONG Jianhua;LIANG Changyong;CHEN Xinwen

作者机构：中国科学院武汉病毒研究所/病毒学国家重点实验室湖北武汉430071 中国科学院研究生院北京100049 

基　　金：国家基础研究重点项目(2003CB1140) 国家自然科学基金(30325002 30670077) 荷兰皇家艺术和科学院资助项目(KNAW Program Strategic Scientific Alliances Project 04-PSA-BD-0) 

出 版 物：《武汉大学学报（理学版）》 (Journal of Wuhan University:Natural Science Edition)

年 卷 期：2010年第56卷第1期

页      码：69-74页

摘      要：依赖于天冬氨酸的半胱氨酸蛋白酶(caspase)在细胞凋亡途径中起着不可替代的关键酶作用.本研究采用原核表达载体pET32a表达和纯化了家蚕细胞Bm-caspase-1及粉纹夜蛾细胞Tni-caspase-1蛋白酶,序列分析表明二者具有相同的内部剪切识别序列,且酶活性位点均为QACQ↓G.纯化获得大量可溶性蛋白酶,Western-blotting分析表明Bm-caspase-1在大肠杆菌中已自我剪切活化,而Tni-caspase-1没有自我剪切,无酶活性;活性Bm-caspase-1蛋白酶对caspase-3特异性底物Ac-DEVD-AMC的降解酶活性可被Z-VAD-FMK呈剂量依赖性抑制,半抑制浓度约20nmol/L.此外,活性Bm-caspase-1蛋白酶能够转活化无活性的Tni-caspase-1蛋白酶原.结果揭示了昆虫细胞caspase同样具有与哺乳动物细胞caspase相似的底物降解活性并可相互剪切激活,为进一步研究昆虫细胞凋亡的分子途径奠定了基础.

主 题 词：Bm caspase-1 Tni—caspase-1 表达 纯化 活性分析 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.14188/j.1671-8836.2010.01.003

馆 藏 号：203803692...