马铃薯类病毒cDNA双体探针的研制及其在检测上的应用

作     者：吕典秋 邱彩玲 王绍鹏 李勇 高云飞 Lü Dian-qiu;QIU Cai-ling;WANG Shao-peng;LI Yong;GAO Yun-fei

作者机构：黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所农业部脱毒马铃薯种薯质量监督检验测试中心哈尔滨150086 

基　　金：国家科技部基础研究重大项目(2004ccc02900) 黑龙江省科技攻关重大项目(GA08B102) 黑龙江省青年基金项目(Qc03c05) 

出 版 物：《园艺学报》 (Acta Horticulturae Sinica)

年 卷 期：2009年第36卷第10期

页      码：1538-1544页

摘      要：在马铃薯纺锤块茎类病毒（Potato spindle tuber viroid,PSTVd）基因组中BamHⅠ位点处（87~92nt）,设计两对含有BamHⅠ重叠区（overlop）的引物。将PCR扩增获得的全长PSTVd分别插入到pGM-T载体中。通过BamHⅠ位点,将两个PSTVd单体连接,构建了PSTVd双体载体。以此载体为模板,通过PCR标记技术,制备了高灵敏高专化的PSTVd双体cDNA地高辛标记探针。以CDP-Star为反应底物进行化学发光反应结果判读,建立了PSTVd的高效杂交检测体系。该体系可以对马铃薯薯块、叶片、芽等不同组织样品进行检测,检测灵敏度达到0.05pg。通过对67份田间采集的样品和实验室保存的资源材料进行检测,比较了cDNA双体探针核酸斑点杂交技术（nucleic acid spot hybridization,NASH）、反转录聚合酶链式反应（reverse-transcriptional polymerase chain reaction,RT-PCR）和往返-聚丙烯酰胺凝胶电泳（return-polyacrylamide gel electrophoresis,R-PAGE）检测技术的阳性样品检出率,结果显示,NASH技术阳性样品检出率为67.7%,与RT-PCR相一致,高于R-PAGE技术的阳性检测率（53.7%）。

主 题 词：马铃薯 马铃薯纺锤块茎类病毒 探针 双体 核酸斑点杂交 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0513-353X.2009.10.021

馆 藏 号：203804244...