口虾蛄原肌球蛋白基因表达及变应原性鉴定

作     者：詹政科 刘志刚 吉坤美 ZHAN Zheng-ke;LIU Zhi-gang;JI Kun-mei

作者机构：深圳大学过敏反应与免疫学研究所广东深圳518060 

基　　金：国家"863"计划(2006AA100308) 深圳市非共识技术创新项目(2007) 深港创新圈项目(2008) 

出 版 物：《中国公共卫生》 (Chinese Journal of Public Health)

年 卷 期：2009年第25卷第4期

页      码：413-415页

摘      要：目的克隆口虾蛄原肌球蛋白(tropomyosin)基因并表达纯化出重组蛋白,研究其变应原性。方法提取口虾蛄总RNA,设计特异引物,通过反转录聚合酶链反应克隆出目的基因片段,测序后将该片段克隆到原核表达载体pET-28a上,转化到***21(DE3)后,经异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化。采用免疫印迹(Western-blot)检测其与对虾过敏的患者血清IgE结合活性。结果经序列测定,该基因含有长度为855bp的开放阅读框,编码284个氨基酸(GenBank登录号为EF584510)。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测该重组变应原在大肠埃希菌中高效表达36kDa的目的蛋白,且重组变应原具有良好的IgE结合活性。结论本研究成功获得了具有变应原活性的重组口虾蛄原肌球蛋白。

主 题 词：口虾蛄 变应原 原肌球蛋白 克隆表达 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100201[100201] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3321/j.issn:1001-0580.2009.04.011

馆 藏 号：203804336...