重组人骨形成蛋白-2基因工程菌株的构建及蛋白复性纯化

作     者：张秀华 刘飞 刘英梅 陈勉 刘霞 刘金明 凌沛学 王凤山 ZHANG Xiu-hua;LIU Fei;LIU Ying-mei;CHEN Mian;LIU Xia;LIU Jin-ming;LING Pei-xue;WANG Feng-shan

作者机构：山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室山东省多糖类药物工程实验室多糖类药物发酵与精制国家地方联合工程实验室博士后科研工作站山东济南250101 山东大学药学院山东济南250101 浙江赛灵特医药科技有限公司浙江杭州311100 

基　　金：山东省级重点实验室专项建设计划(SDKL2017023) 山东省自然科学基金(ZR2015QL007,ZR2017BH051) 泰山学者工程专项 

出 版 物：《食品与药品》 (Food and Drug)

年 卷 期：2019年第21卷第5期

页      码：337-342页

摘      要：目的构建一株高效表达人骨形成蛋白2(hBMP-2)的基因工程菌株,并通过复性、纯化获得有生物活性的rhBMP-2。方法采用基因工程法将hBMP-2基因片段与pET-28a(+)质粒载体相连,构建大肠杆菌表达系统。工程菌发酵后,超声破碎收集包涵体,包涵体经裂解后通过稀释复性法进行复性,SDS-PAGE检测复性情况,并采用HiTrapHeparinHP纯化,C2C12细胞检测活性。结果rhBMP-2在大肠杆菌中以无活性的包涵体形式表达,1L发酵罐高密度发酵rhBMP-2包涵体湿重可达20g/L。采用稀释法复性,蛋白复性率大于40%,亲和层析纯化后,二聚体蛋白纯度达95%以上,且能诱导C2C12细胞碱性磷酸酶的表达,具有同市售产品相同的细胞活性。结论成功构建了高效表达rhBMP-2的基因工程菌株,复性方法简单且无需对包涵体进行纯化,蛋白复性浓度高,纯化方法简便,大大降低了工业化生产成本。

主 题 词：人骨形成蛋白2 大肠杆菌 包涵体 复性 纯化 生物活性 

学科分类：1007[医学-药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-979X.2019.05.001

馆 藏 号：203807078...