小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作     者：周岩岩 李玲霞 吴锦艳 余树芳 李娇阳 刘丹 冯倩 孙晶晶 何苗 魏凡华 尚佑军 ZHOU Yan-yan;LI Ling-xia;WU Jin-yan;YU Shu-fang;LI Jiao-yang;LIU Dan;FENG Qian;SUN Jing-jing;HE Miao;WEI Fan-hua;SHANG You-jun

作者机构：宁夏大学农学院宁夏银川750021 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 

基　　金：国家重点研发计划项目(2018YFD0502000) 国家现代肉羊产业体系建设项目(CARS-39-04B) 甘肃省草食畜牧产业体系项目(GARS08) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2019年第49卷第10期

页      码：1277-1282页

摘      要：为开发可用于小反刍兽疫病毒(PPRV)诊断及其抗原的检测方法,参考GenBank中PPRV Nigeria75/1株N基因序列设计引物,采用RT-PCR方法获得目的基因后连接到载体pCzn1中,转化到大肠杆菌DH5α克隆菌株,经PCR和双酶切鉴定测序后,将阳性克隆转化至大肠杆菌BL21 (DE3)菌株后采用IPTG进行诱导表达。结果表明,成功地构建了含有小反刍兽疫病毒N基因的重组质粒pCzn1-N;诱导条件经过优化后N蛋白为可溶性表达,重组蛋白大小约为64 ku,能够与PPRV阳性血清较好地反应;制备的家兔多克隆抗体效价为1∶128 000,经过纯化后抗体效价为1∶64 000且具有较高的结合特异性;用间接ELISA和Western-blot对N蛋白纯化后制备的家兔多克隆抗体进行分析,发现重组N蛋白的免疫原性良好,且制备的多克隆抗体特异性良好。这表明重组的N蛋白具有较高的特异性及反应活性。

主 题 词：小反刍兽疫病毒 N基因 原核表达 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0173

馆 藏 号：203807307...