带有人凝血因子Ⅸ cDNA的反转录病毒载体的构建及其在离体细胞中的高效表达

作     者：卢大儒 邱信芳 郑冰 邱晓赟 薛京伦 

作者机构：复旦大学遗传学研究所上海200433 

基　　金：国家"八六三"高技术发展计划资助 

出 版 物：《中国科学（B辑）》 (Science in China(Series B))

年 卷 期：1994年第24卷第11期

页      码：1183-1189页

摘      要：报道了带有人凝血因子IX cDNA的高滴度高表达安全性反转录病毒载体的构建。采用LNL6反转录病毒载体为骨架,构建了由人巨细胞病毒启动子(hCMV)驱动的反转录病毒载体LNCIX,由反转录病毒LTR启动子驱动的反转录病毒载体LIXSN,以及由LTR和CMV启动子共同控制转录的反转录病毒载体LCIXSN,分别用电穿孔方法转导PA317辅助细胞株。LNCIX和LIXSN反转录病毒载体能在离体细胞中表达人IX因子蛋白,而LC IXSN反转录病毒载体转移到离体细胞中没有检测到人IX因子蛋白。PA317/INCIX细胞的产病毒滴度为8×10~5CFU/ml,该重组病毒感染人纤维肉瘤细胞HT1080及血友病B患者皮肤成纤维细胞(HSF),用ELISA方法分别测定这些细胞的IX因子蛋白产量,LNCIX载体在HT-1080细胞中的人IX因子平均表达量为3.3μg/10~6细胞·d^(-1);在HSF细胞中的平均表达量为2.5μg/10~6细胞·d^(-1),其中80％以上的IX因子具有凝血活性,与过去相比,提高了产病毒滴度,增加了人IX因子的平均表达量,病毒载体骨架的设计更完善,降低了产生野生型病毒的概率,提高了安全性,对于进一步开展血友病B的基因治疗具有重要的意义。

主 题 词：基因治疗 反转录病毒 载体 人凝血因子IX 血友病 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203808704...