刚地弓形虫主要抗原B细胞表位的筛选及鉴定

作     者：曹利民 潘宇红 卢志贤 陈江 陈蓉芳 程华莉 姜东林 司进 章辉 朱荫昌 Cao Li-min;Pan Yu-hong;Lu Zhi-xian;Chen Jiang;Chen Rong-fang;Cheng Hua-li;Jiang Dong-lin;Si Jin;Zhang Hui;Zhu Yin-chang

作者机构：江苏省无锡市第三人民医院无锡214041 江苏省寄生虫病防治研究所 

基　　金：江苏省寄生虫分子生物学重点实验室 江苏省寄生虫病学重点学科开放课题(WK005-008) 

出 版 物：《中国血吸虫病防治杂志》 (Chinese Journal of Schistosomiasis Control)

年 卷 期：2007年第19卷第1期

页      码：24-27页

摘      要：目的筛选刚地弓形虫主要抗原B细胞表位并在原核表达载体中表达,对纯化的表位重组蛋白进行免疫反应性鉴定。方法用计算机软件BioSun、DNAstar综合分析6个弓形虫主要抗原的亲水性、可及性、柔韧性、二级结构、极性参数等,每一抗原分子预测2个最佳表位,设计合成24条共12对寡核苷酸,两端分别引入NocI、XhoI酶切位点,退火形成的双链定向克隆至原核表达载体pET-32c中,EcoRI单酶切鉴定重组质粒Epitope/pET-32c。将含有Epitope/pET-32c的BL21单菌落接种至LB肉汤培养基中培养,导入表达。表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫印迹试验(Westernblot)分析重组表位蛋白与弓形虫抗原免疫血清的免疫反应性。结果成功构建了12个原核表达质粒Epitope/pET-32c,并经测序证实,在***21有11个表位基因能有效表达重组融合蛋白;纯化的表位蛋白大小均在20.0kDa左右;Westernblot结果显示表位蛋白SAG2-A、SAG3-B能被弓形虫抗原免疫血清识别,且反应较强,SAG2-B为弱阳性,其余的则不能被识别。结论成功筛选到3个弓形虫B细胞表位基因,为进一步构建弓形虫复合表位抗原诊断弓形虫病奠定了基础。

主 题 词：弓形虫 抗原 B细胞表位 鉴定 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-6661.2007.01.007

馆 藏 号：203809190...