猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作     者：江珊 李富强 李秀丽 王利丽 郑丽 张莉 路超 鄢明华 JIANG Shan;LI Fu-qiang;LI Xiu-li;WANG Li-li;ZHENG Li;ZHANG Li;LU Chao;YAN Ming-hua

作者机构：天津市畜牧兽医研究所天津300381 农业农村部兽用药物与诊断技术天津科学观测实验站天津300381 天津市畜禽健康养殖技术工程中心天津300381 

基　　金：天津市高端兽药先进制造科技重大专项(17ZXGSNC00080) 天津市现代农业产业技术体系岗位专家项目(ITTPRS2017003) 天津市农业科学院青年科研人员创新研究与实验项目(201912) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2019年第40卷第10期

页      码：10-17页

摘      要：为建立一种快速、灵敏、准确的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)分子检测方法,根据PDCoV M基因的保守序列设计并合成引物和探针,建立了PDCoV M基因Taq Man荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法标准曲线具有良好的线性关系,相关系数为0.998;敏感性好,最低可检测到10 copies/μL的PDCoV M基因标准品;特异性试验结果显示,该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)及大肠埃希菌K88菌株均无交叉反应;重复性试验变异系数低于2%,表明重复性良好。对121份临床样本进行检测,阳性检出率为53.7%(65/121),随机选择10份阳性样品的扩增产物进行测序分析,进一步证实扩增产物中含有PDCoV。该方法具有敏感性高、特异性强、用时短和高通量等特点,适用于PDCoV的定量检测与分子流行病学调查,为PDCoV的准确定量及进一步研究奠定了基础。

主 题 词：猪德尔塔冠状病毒 M基因 Taq Man探针 荧光定量PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.10.003

馆 藏 号：203809476...