利用同源重组构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库

作     者：彭媛媛 邓璐霞 石艳娥 赵媛 陈军利 王薇 冯云 吴琦 王伯瑶 黄宁 Peng Yuan-yuan;Deng Lu-xia;Shi Yan-e;Zhao Yuan;Chen Jun-li;Wang Wei;Feng Yon;Wu Qi;Wang Bo-yao;Huang Ning

作者机构：四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学感染免疫教研室四川省成都市610041 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30671963 30470763) 纽约中华医学会基金(98-681)资助~~ 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2008年第12卷第28期

页      码：5490-5493页

摘      要：背景:酵母双杂交技术是目前应用最成功的研究蛋白质相互作用的技术平台。目的:运用SMART(switching mechanism at5′end of RNA transc-ript)技术构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-07/2007-01在四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学感染免疫实验室完成。材料:人肺鳞状细胞癌旁组织由四川大学华西医学中心附属第一医院胸外科提供。方法:运用SMART技术,以纯化的Poly(A)+RNA为模板,用Powerscript逆转录酶进行转录,并在mRNA的5’末端添加一段5’-oligo作为延伸后的模板,从而富集全长cDNA。纯化的双链cDNA与线性化pGADT7-Rec质粒载体共同转化酵母菌株感受态AH109,经胞内同源重组形成环状文库质粒。应用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选并收集所有克隆从而获得酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。主要观察指标:采用琼脂糖凝胶电泳观察人肺鳞状细胞癌旁组织的cDNA文库构建结果,并进行文库容量及多态性鉴定。结果:①总RNA和mRNA纯度较好,比较完整。②双链cDNA文库大小介于0.5～3kb之间。③共获得1.2×106转化子,重组子不同插入片断大小在0.3～2kb之间,文库具有较好的多样性。结论:在酵母菌株AH109成功构建了用于酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。

主 题 词：SMART技术 cDNA文库 同源重组 酵母双杂交 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 0403[0403] 1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 0703[理学-化学类] 100214[100214] 0836[0836] 10[医学] 

D　O　I：10.3321/j.issn:1673-8225.2008.28.026

馆 藏 号：203809627...