BMI-1 shRNA载体的构建及其在Hela细胞中的表达

作     者：陈凤花 王琳 李一荣 胡丽华 CHEN Fenghua;WANG Lin;LI Yirong;HU Lihua

作者机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科武汉430022 

基　　金：湖北省科技攻关项目(No:2005AA304B08) 

出 版 物：《临床血液学杂志（输血与检验）》 (Journal of Clinical Hematology(Blood Transfusion & Laboratory Medicine))

年 卷 期：2009年第22卷第4期

页      码：418-422页

摘      要：目的:针对BMI-1基因的不同部位构建4种不同的BMI-1 shRNA真核表达载体,转染人宫颈癌细胞系Hela并筛选其有效序列。方法:应用DNA重组技术将针对人BMI-1基因的不同部位所设计的4对shRNA序列克隆到真核表达质粒psi RNA-hH1neo中,构建BMI-1 shRNA表达载体BMI-1 shRNA1、BMI-1 shRNA2、BMI-1 shRNA3和BMI-1 shRNA4,用阳离子脂质体介导转染Hela细胞以筛选其有效序列。结果:4个BMI-1 shRNA表达载体BMI-1 shRNA1、BMI-1 shRNA2、BM-1 shRNA3和BMI-1shRNA4经测序鉴定证明插入正确。②在Hela细胞中转染BMI-1 shRNA2和BMI-1 shRNA4能显著下调BMI-1mRNA表达,抑制率分别为59.9%和67.4%(P<0.01)。结论:成功构建了真核表达载体BMI-1 shRNA1、BMI-1 shRNA2、BMI-1 shRNA3和BMI-1 shRNA4,其中BMI-1 shRNA2和BMI-1 shRNA4能有效地抑制BMI-1在Hela细胞中的表达。本工作为今后研究BMI-1在肿瘤基因治疗中奠定基础。

主 题 词：RNA干扰 BMI-1 Hela 短发夹状RNA 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100101[100101] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-2806-B.2009.04.007

馆 藏 号：203810146...