has-miR-181b慢病毒表达载体的构建与鉴定

作     者：吴德刚 骆慧 范立刚 王颖毅 韩斌 尤永平 刘宁 

作者机构：南京医科大学第一附属医院神经外科江苏省210029 

基　　金：国家自然科学基金(81172389 81101901) 江苏省自然科学基金(BK2010580 BK2011847) 江苏高校优势学科建设工程资助项目 

出 版 物：《江苏医药》 (Jiangsu Medical Journal)

年 卷 期：2012年第38卷第10期

页      码：1117-1120页

摘      要：目的构建靶向has-miR-181b基因的慢病毒表达载体。方法根据has-miR-181b序列设计互补的单链寡核苷酸引物序列进行退火延伸后连入经双酶切的pGCSIL-GFP载体质粒,与辅助元件载体质粒pHelper 1.0及pHelper 2.0共同导入感受态细胞T293进行慢病毒包装,收集、浓缩并测定病毒滴度。用所得病毒转染U87胶质瘤细胞;实时定量PCR检测转染后miR-181b表达,流式细胞术检测细胞凋亡以及Transwell实验评价细胞侵袭能力的改变。结果目的序列成功连接入载体,测序分析证实目的序列载体构建成功,并测得病毒滴度为6×109 TU/ml;病毒转染U87胶质瘤细胞能够显著上调has-miR-181b表达,该病毒载体能够有效诱导胶质瘤细胞凋亡,显著抑制U87细胞的侵袭性。结论成功建立高效稳定表达has-miR-181b的慢病毒转染系统,体外实验中能够有效诱导U87胶质瘤细胞凋亡,并且可以抑制胶质瘤的侵袭能力。

主 题 词：microRNA-181b 慢病毒表达载体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.19460/j.cnki.0253-3685.2012.10.001

馆 藏 号：203811457...