慢病毒介导磷酸二酯酶7A基因沉默细胞株的构建及三磷酸腺苷结合盒转运体A1的表达变化

作     者：向乐 唐菀泽 张志珍 马卫列 Le Xiang;Wan-ze Tang;Zhi-zhen Zhang;Wei-lie Ma

作者机构：广东医学院生物化学与分子生物学教研室广东东莞523808 

基　　金：国家自然科学基金(No:81170267) 广东省高等学校人才引进专项[No:粤财教(2013)246号] 

出 版 物：《中国现代医学杂志》 (China Journal of Modern Medicine)

年 卷 期：2016年第26卷第3期

页      码：1-8页

摘      要：目的利用慢病毒介导构建磷酸二酯酶7A(PDE7A)基因沉默人单核巨噬细胞(THP-1)株,并分析沉默细胞株的三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达变化。方法以PDE7A基因为靶点,设计合成3段sh RNA片段,与慢病毒载体Pmi Rzip连接,构建重组质粒。测序鉴定后进行病毒包装,感染THP-1细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)进行分析,确定最佳干扰片段。嘌呤霉素筛选得到PDE7A基因沉默稳转细胞株。q PCR和Western blot检测鉴定所构建的细胞株,将其诱导成为泡沫细胞后鉴定ABCA1基因的表达。结果转染sh RNA1、sh RNA2、sh RNA3细胞的PDE7A相对表达量分别为(0.480±0.028)、(0.561±0.016)和(0.377±0.013),故选择sh RNA3作为干扰PDE7A基因的最佳片段。采用1.4 g/L嘌呤霉素成功筛选出PDE7A沉默细胞株,q PCR和Western blot检测PDE7A基因的干扰效率,其抑制效率>70%。将其诱导成巨噬泡沫细胞后,Western blot检测显示,ABCA1的表达量增加40%。结论成功构建PDE7A sh RNA慢病毒干扰载体,并筛选出PDE7A基因沉默的THP-1细胞株,且ABCA1的表达量增加。

主 题 词：磷酸二酯酶7A RNA干扰 慢病毒 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-8982.2016.03.001

馆 藏 号：203813107...