基于CRISPR/Cas9技术构建Cyr61敲低HEK293T稳定细胞株及其生物学功能检测

作     者：王俊杰 姜艳 Soulixay Senouthai 付冬冬 尤燕舞 WANG Junjie;JIANG Yan;Soulixay Senouthai;FU Dongdong;YOU Yanwu

作者机构：右江民族医学院附属医院肾内科百色533000 右江民族医学院科学实验中心百色533000 

基　　金：广西自然科学基金重点项目(批准号:2017GXNSFDA198005) 广西高等学校科研重点项目(批准号:KY2015ZD092) 右江民族医学院校级科研课题(批准号:YY2016KY011) 右江民族医学院2016年度第二批广西高校重点实验室开放课题(批准号:KFKT20160055)资助的课题 

出 版 物：《中国细胞生物学学报》 (Chinese Journal of Cell Biology)

年 卷 期：2019年第41卷第9期

页      码：1763-1771页

摘      要：为了探讨Cyr61的生物学功能,该研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Cyr61敲低的HEK293T稳定细胞株,并在体外研究Cyr61对HEK293T细胞增殖和凋亡的影响。根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,应用http://***/在线设计3条Cyr61的导向RNA(guide RNA,gRNA),用LentiCRISPRv2作为载体构建LentiCRISPRv2-gRNA重组质粒并转化至感受态的Stbl3菌体中,经筛选后包装成Cyr61 CRISPR/Cas9 KO质粒,利用Cyr61 CRISPR/Cas9 KO质粒和HDR质粒转染HEK293T细胞,加入嘌呤霉素(8μg/mL)进行筛选,通过实时荧光定量PCR技术及蛋白质免疫印迹(Western blot)鉴定出HEK293T敲低Cyr61细胞株;常规培养细胞,利用细胞计数检测试剂盒(CCK8)检测细胞增殖情况,流式细胞技术检测细胞凋亡情况。该研究成功构建出Cyr61敲低HEK293T细胞株,与对照组相比,Cyr61敲低细胞株的增殖明显升高(P<0.05),凋亡率明显减少(P<0.05)。通过CRISPR/Cas9基因编辑系统成功构建Cyr61敲低HEK293T稳定细胞株,为研究Cyr61基因提供了有效的工具。

主 题 词：CRISPR/Cas9 Cyr61 基因编辑 增殖 凋亡 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.11844/cjcb.2019.09.0010

馆 藏 号：203817537...