PCR靶向克隆法构建携带人类神经生长因子β基因的含有EGFP的重组腺病毒穿梭质粒

作     者：谢华 王清秀 王家宁 肖敏 黄永章 XIE Hua;WANG Qingxiu;WANG Jianing;XIAO Ming;HUANG Yongzhang

作者机构：郧阳医学院附属太和医院急诊科湖北十堰442000 同济大学附属东方医院麻醉科上海200120 郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所湖北十堰442000 

基　　金：湖北省教育厅重大项目(编号:Z200724001) 同济大学附属东方医院科研项目(编号:DF2007R02) 上海市浦东新区优秀学科带头人培养计划(编号:PWRd2007-04) 

出 版 物：《武汉大学学报（医学版）》 (Medical Journal of Wuhan University)

年 卷 期：2009年第30卷第2期

页      码：212-215,I0002页

摘      要：目的:在靶向克隆酶的作用下,利用PCR靶向克隆构建携带人神经生长因子的重组腺病毒穿梭质粒pShuttle-hNGFβ-EGFP。方法:按PCR引物设计原则设计两条引物,分别在上下游引物的5′端加上12个碱基与线性化载体切口两端同源载体序列,引物合成后PCR反应扩增目的基因hNGF-β,提纯后与EcoRⅤ酶切的穿梭质粒pShuttle-IRES-hrEGFP在靶向克隆酶(LPReccoenzyme)的作用下37℃孵育15min,转化感受态大肠杆菌,碱裂解法制备及纯化质粒DNA。结果:EcoRⅤ酶切鉴定证实pShuttle-hNGFβ-EGFP构建成功。结论:在不需要限制性内切酶的情况下用靶向克隆酶连接可快速、准确得到穿梭质粒pShuttle-hNGFβ-EGFP。

主 题 词：靶向克隆 穿梭质粒 神经生长因子 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.14188/j.1671-8852.2009.02.008

馆 藏 号：203817697...