羊鞭虫病实时荧光PCR检测方法的建立

作     者：于志超 陈林军 赵治国 崔强 延涵 王海艳 赵林立 李刚 YU Zhi-chao;CHEN Lin-jun;ZHAO Zhi-guo;CUI Qiang;YAN Han;WANG Hai-yan;ZHAO Lin-li;LI Gang

作者机构：内蒙古出入境检验检疫局技术中心 

基　　金：内蒙古检验检疫局自立科技基金资助项目(NMCIQ-IK2017-012) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2019年第39卷第10期

页      码：1981-1986页

摘      要：为建立一种快速检测羊鞭虫病实时荧光PCR方法,根据GenBank已经公布的羊鞭虫(Trichuris ovis)ITS基因序列(登录号:JF680987.1),设计特异性引物和TaqMan探针,以重组质粒作为绝对定量模板,建立检测羊鞭虫病的TaqMan实时荧光PCR方法。对反应体系的特异性、敏感性和稳定性进行评价,并用该方法对临床样品进行检测。结果显示,该检测方法线性关系良好,标准曲线的相关系数R^2=0.994,扩增效率E=1.05。该方法特异性强,与其他8种常见家畜寄生性线虫病不发生交叉反应;灵敏度高,最低检出下限为31.7拷贝/μL;重复性好,组内和组间变异系数分别为0.43%~1.04%和1.20%~1.91%,均小于2.00%。用建立的实时荧光PCR方法和显微镜检查方法分别对20份临床样品进行检测,实时荧光PCR和显微镜检查方法检出的阳性样品分别为14和9份。本研究建立的TaqMan实时荧光PCR方法能在粪便中快速、准确、灵敏检测羊鞭虫卵,为羊鞭虫病的检测和防控提供新的方法。

主 题 词：鞭虫 ITS基因 TaqMan探针 实时荧光PCR 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.10.16

馆 藏 号：203817698...