先天性失氯性腹泻相关SLC26A3 c.392C>G(p.P131R)突变体细胞模型的建立及其作用机制的初步研究

作     者：张妮妮 郭宏伟 林燕 张薇 张伟 王宝西 江逊 ZHANG Ni-Ni;GUO Hong-Wei;LIN Yan;ZHANG Wei;ZHANG Wei;WANG Bao-Xi;JIANG Xun

作者机构：空军军医大学/第四军医大学唐都医院儿科 

出 版 物：《中国当代儿科杂志》 (Chinese Journal of Contemporary Pediatrics)

年 卷 期：2019年第21卷第11期

页      码：1131-1137页

摘      要：目的 建立先天性失氯性腹泻(CCD)相关SLC26A3 c.392C>G(p.P131R)突变体细胞模型并初步研究其生物学功能.方法 根据GenBank中SLC26A3基因序列,设计特异性识别SLC26A3基因392位点的上下游单导RNA(sgRNA),与酶切后的pSpCas9-puro载体混合构建真核重组表达质粒(pSpCas9-SLC26A3).将重组质粒和供体DNA模板单链DNA寡核苷酸(ssODN)共转染至Caco-2细胞,采用Taqman基因型分析和Sanger测序鉴定SLC26A3 c.392C>G(p.P131R)在Caco-2细胞中的表达.以野生型Caco-2细胞为正常对照组,以成功表达SLC26A3 c.392C>G(p.P131R)的Caco-2细胞为P131R组,两组细胞分别经100 ng/mL TNF-α诱导并命名为TNF-α组和TNF-α+P131R组,通过电-细胞-基质阻抗传感(ECIS)分析检测上述4组肠上皮细胞单层屏障功能的变化;通过Western blot检测正常对照组和P131R组细胞SLC26A3蛋白的表达变化.结果 成功构建了真核重组表达质粒(pSpCas9-SLC26A3).Taqman基因型分析和Sanger测序均验证SLC26A3 c.392C>G(p.P131R)表达的Caco-2细胞模型构建成功.ECIS分析显示:与正常对照组相比,P131R组肠上皮细胞单层通透性明显增加(PG(p.P131R)可引起SLC26A3蛋白表达下降,从而增加肠上皮细胞单层通透性,引起相关腹泻的发生.

主 题 词：先天性失氯性腹泻 SLC26A3基因 单核苷酸多态性 肠上皮细胞 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.7499/j.issn.1008-8830.2019.11.014

馆 藏 号：203819306...