椰子花粉过敏原基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

作     者：孟光 姚敏 刘志刚 邬玉兰 张红云 MENG Guang;YAO Min;LIU Zhi-Gang;WU Yu-Lan;ZHANG Hong-Yun

作者机构：海口市人民医院海口570208 深圳大学过敏反应与免疫学研究所深圳518060 

基　　金：国家自然科学基金(No.30070702) 广东省自然科学基金(No.7301310、No.020738) 广东省科技重点专项(No.2003A3080502) 深圳市科技计划(No.200326) 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2009年第25卷第6期

页      码：532-535页

摘      要：目的:克隆并表达椰子花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(Profilin)。方法:利用RT-PCR结合RACE技术克隆椰子花粉中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个椰子花粉profilin的开放阅读框,将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性。结果:克隆获得了椰子花粉profilin的全长基因,由608个碱基组成,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸。经分析,这个序列编码的蛋白为小分子量酸性蛋白,等电点为4.61,分子量约为14 kD。此序列已被GeneBank收录,登陆号为EF173598。重组椰子花粉profilin在大肠杆菌中高效的表达和纯化后,经Western blot检测具有良好的免疫学活性。结论:成功地克隆和表达了椰子花粉profilin,为该花粉profilin用于椰子花粉过敏诊断和免疫治疗提供了理论依据。

主 题 词：椰子花粉 profilin 基因表达 纯化 鉴定 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203819923...