伯氏疏螺旋体TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法的建立及对新疆地区蜱的检测

作     者：王娅 叶锋 刘丽娅 谢彩云 谷文喜 钟旗 易新萍 古丽扎提·塔力甫汗 马晓菁 Wang Ya;Ye Feng;Liu Liya;Xie Caiyun;Gu Wenxi;Zhong Qi;Yi Xinping;Gulizhati·TaliFuhan;Ma Xiaojing

作者机构：新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052 新疆畜牧科学院兽医研究所新疆乌鲁木齐830011 

基　　金：国家重点研发计划项目(2017YFC1200500) 

出 版 物：《中国动物检疫》 (China Animal Health Inspection)

年 卷 期：2019年第36卷第11期

页      码：89-94,99页

摘      要：为建立一种TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR方法,来快速、特异地检测伯氏疏螺旋体,根据GenBank发表的伯氏疏螺旋体16SrRNA序列,应用分子生物学软件进行比对,选取保守序列设计特异性引物及TaqMan-MGB探针,并优化荧光定量PCR反应体系及条件,分别对大肠杆菌、沙门氏菌及钩端螺旋体进行扩增;构建伯氏疏螺旋体标准株16SrRNA基因片段阳性质粒,10倍系列稀释后进行real-timePCR扩增,测定该方法的敏感性。结果可见:仅伯氏疏螺旋体出现阳性扩增,而大肠杆菌、沙门氏菌及钩端螺旋体扩增均为阴性;该方法对阳性质粒的检测限约为100copies/μL。应用该方法对新疆地区的100份蜱DNA样本进行检测,发现7份为伯氏疏螺旋体阳性。结果表明,本研究建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法具有较高的特异性及良好的敏感性,为今后伯氏疏螺旋体的快速诊断及流行病学调查提供了技术支撑。

主 题 词：伯氏疏螺旋体 TaqMan-MGB探针 荧光定量PCR 蜱 检测 新疆 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-944X.2019.11.019

馆 藏 号：203820380...