鳜弹状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作     者：梁红茹 蔡秀珠 范芷仪 林强 付小哲 刘礼辉 黄志斌 牛银杰 林蠡 李宁求 LIANG Hong-ru;CAI Xiu-zhu;FAN Zhi-yi;LIN Qiang;FU Xiao-zhe;LIU Li-hui;HUANG Zhi-bin;NIU Yin-jie;LIN Li;LI Ning-qiu

作者机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室/广东省水产动物免疫技术重点实验室广东广州510380 仲恺农业工程学院动物科技学院广东广州570228 

基　　金：国家自然科学基金(31872589) 广东省促进经济发展专项资金(海洋经济发展用途)(GDME-20181007) 广州市珠江科技新星(201710010087) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2019年第41卷第9期

页      码：929-934页

摘      要：为建立快速、准确检测鳜弹状病毒(SCRV)的TaqMan荧光定量PCR方法,本实验根据弹状病毒N基因中的保守序列,设计合成了一对特异性引物和TaqMan探针,以构建的标准质粒为模板,经条件优化后建立了SCRV的TaqMan荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行试验。结果显示,建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法标准曲线的相关系数为0.999,质粒标准品在1×10~8拷贝/μL^1×10~1拷贝/μL范围内有较好的线性关系;该方法可以特异性检测SCRV,但对草鱼出血病病毒(GCRV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、罗非鱼湖病毒(TiLV)、石斑鱼虹彩病毒(SGIV)、传染性脾肾坏死病(ISKNV)、神经坏死病毒(NNV)及鲤春病毒血症病毒(SVCV)等7种常见鱼类病毒检测结果均为阴性;最低可检测到的质粒标准品浓度为102拷贝/μL,比常规PCR方法灵敏100倍;该方法组内与组间变异系数均小于2%。采用该方法对35份临床样品进行检测,结果显示阳性检出率为31%,而普通PCR阳性检出率为14%,该方法检出率比常规PCR高。本研究建立的SCRV的TaqMan荧光定量PCR检测方法为SCRV的快速检测提供了可行的技术手段。

主 题 词：鳜鱼弹状病毒 N基因 TaqMan荧光定量PCR 

学科分类：0906[农学-水产类] 09[农学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.201901040

馆 藏 号：203820424...