猪链球菌2型四川人源分离株ZYH24细胞外蛋白因子的原核表达及活性分析

作     者：王海丽 鞠爱萍 王长军 潘秀珍 郑峰 陆承平 唐家琪 WANG Hai-Li;JU Ai-Ping;WANG Chang-Jun;PAN Xiu-Zhen;ZHENG Feng;LU Cheng-Ping;TANG Jia-Qi

作者机构：南京军区军事医学研究所南京210002 南京农业大学动物医学院南京210095 

基　　金：国家"十五"重大传染病科技攻关课题(No.2003BA712A03-05) 国家自然科学基金(No.30600533) 江苏省自然科学基金(No.BK2006014)资助 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2007年第23卷第3期

页      码：247-250页

摘      要：目的克隆、表达猪链球菌2型四川人源分离株ZYH24细胞外蛋白因子基因片段,分析蛋白活性。方法根据GenBank ***2epf基因序列设计引物,克隆ZYH24株epf基因片段并进行序列分析;构建原核表达质粒pGEX4T-2-epf,在大肠杆菌中诱导带有谷胱苷肽转移酶(GST)标签的融合蛋白EF-GST的表达;亲和层析法纯化融合蛋白EF-GST,用凝血酶切除重组蛋白中的GST,获得纯化的EF抗原;SDS-PAGE和Western blot分析诱导表达及纯化的重组蛋白。结果序列分析表明,获得的epf基因片段长895bp;原核表达的融合蛋白EF-GST分子量约62000,凝血酶处理后的EF抗原分子量约35000,两者均可与制备的EF多克隆抗血清发生特异性反应。结论成功克隆了人源分离株ZYH24epf基因片段,在原核系统实现高效的功能性表达,为开展EF蛋白的相关研究奠定了基础。

主 题 词：细胞外蛋白因子 原核表达 蛋白纯化 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203824727...