大肠杆菌表达人IL-21融合蛋白的纯化和抗原性分析

作     者：付强 钱冬萌 闫志勇 侯伟 王斌 

作者机构：滨州医学院烟台校区免疫学教研室山东烟台264003 

基　　金：青岛市科技局科研基金项目(04-2-JZ-95) 滨州医学院科研启动资金资助课题(BY2005KYQD02) 

出 版 物：《青岛大学医学院学报》 (Acta Academiae Medicinae Qingdao Universitatis)

年 卷 期：2008年第44卷第1期

页      码：41-43页

摘      要：目的在大肠杆菌中表达人IL-21编码基因,并进行蛋白纯化和抗原性分析。方法以经PHA刺激的人扁桃体细胞cDNA文库为模板,经PCR获得IL-21全基因片段。测序确认后,分别设计含BamHⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,经PCR获得IL-21成熟肽的编码基因。将此IL-21基因插入表达载体pGEX-4T-2,重组克隆经酶切与测序确认后转化大肠杆菌DH5α,进行IPTG诱导表达。经琼脂糖珠结合的纯化方法所得产物用WesternBlotting作抗原性分析。结果SDS-PAGE显示经IPTG诱导后的大肠杆菌DH5α表达与理论相符的条带,并获得了与理论值相符的纯化条带,在进一步的Western Blotting分析中发现表达的蛋白能与IL-2的单抗产生结合反应。结论人IL-21编码基因克隆载体在大肠杆菌中成功表达,同时建立了该蛋白的琼脂糖珠纯化方法,通过免疫印迹实验揭示了原核表达的IL-21蛋白与IL-2之间结构的相似性。

主 题 词：白细胞介素21 基因表达 免疫印迹法 重组融合蛋白质类 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

馆 藏 号：203824926...