利用pSOS-HUS系统构建针对小鼠h1-calponin的RNA干扰载体

作     者：孙启荻 苏楠 陈锚锚 金旻 赵玲 陈林 

作者机构：第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所全军战创伤中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 

基　　金：国家重点基础研究发展规划项目(2005CB522604) 国家自然基金杰出青年基金(30425023) 国家自然基金重点项目(30530410) 

出 版 物：《中华医院感染学杂志》 (Chinese Journal of Nosocomiology)

年 卷 期：2009年第19卷第14期

页      码：1812-1815页

摘      要：目的利用pSOS-HUS系统构建针对小鼠碱性调宁蛋白(h1-calponin)的RNA干扰载体并对其干扰效率进行验证。方法利用在线软件设计三段针对小鼠h1-calponin cDNA的寡核苷酸(A、B、C)片段,经退火成为双链后分别装入pSOS-HUS载体,得到载体调宁蛋白-PS-A/B/C;再将h1-calponin cDNA插入该载体和GFP一起融合表达,得到调宁蛋白RNAi-A/B/C3个载体;对上述载体经酶切和测序鉴定后,转染至HEK293T细胞株,通过倒置荧光显微镜观察GFP荧光强度来判断上述载体的干扰效果。结果经酶切和测序证明针对小鼠h1-calponin的3个RNA干扰载体构建成功,荧光显微镜下观察显示,和空载体pSOS-HUS(未插入RNA干扰片段)相比,A组的荧光强度减弱最明显,B的基本不变,C的荧光强度稍有减弱。结论成功构建了针对h1-calponin的RNA干扰载体。

主 题 词：pSOS-HUS 碱性调宁蛋白 RNAi 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

馆 藏 号：203825528...