稳定敲除CACYBP/SIP基因的MCF-7细胞株的构建及其细胞增殖的变化

作     者：王会峰 赵志军 王燕 吴媛媛 王宁菊 WANG Hui-feng;ZHAO Zhi-jun;WANG Yan;WU Yuan-yuan;WANG Ning-ju

作者机构：宁夏医科大学总医院肿瘤医院肿瘤内科宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 

基　　金：国家自然科学基金(81460400) 

出 版 物：《基础医学与临床》 (Basic and Clinical Medicine)

年 卷 期：2019年第39卷第12期

页      码：1682-1688页

摘      要：目的利用CRISPR/Cas9系统构建CACYBP-/-乳腺癌MCF-7基因缺陷细胞株,并研究该基因敲除株对细胞增殖能力的影响。方法设计特异sgRNA序列,构建Lenti-CAS9-sgRNA-puro质粒,转染MCF-7细胞,puromycin抗性筛选,Cruiser检测sgRNA活性,极限稀释法筛选单克隆株,Western blot检测CACYBP/SIP蛋白的表达,Brdu和MTT试剂盒检测CACYBP/SIP缺失后细胞增殖能力。结果成功构建Lenti-CAS9-sgRNA-puro质粒,puromycin最佳筛选浓度为0.9μg/mL,sgRNA1活性最高,获得的单克隆系测序唯一敲除CACYBP/SIP的MCF-7细胞株增殖能力减弱(P<0.05)。结论敲除CACYBP/SIP的MCF-7细胞株增殖能力减弱。

主 题 词：CRISPR/Cas9系统 CACYBP/SIP MCF-7细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.16352/j.issn.1001-6325.2019.12.004

馆 藏 号：203826156...