鸡毒支原体醛缩酶的原核表达及膜定位鉴定

作     者：何随彬 谭磊 包世俊 郭小琴 仇旭升 宋翠萍 费荣梅 丁铲 

作者机构：南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 

基　　金：国家自然科学基金项目(30871883) 公益性行业(农业)科研专项(201003012) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2013年第43卷第1期

页      码：42-46页

摘      要：为了探明醛缩酶在支原体中的定位,根据已发表的鸡毒支原体醛缩酶(fba)基因序列设计特异性的引物,以鸡毒支原体Rlow株基因组为模板,通过Overlap PCR点突变扩增鸡毒支原体醛缩酶fba基因,将fba克隆至pET-28a(+)载体后进行序列测定和分析。结果表明,fba基因全长873bp,编码290个氨基酸。将构建的重组表达质粒pET28a-fba转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功获得表达融合蛋白rMGfba,大小约为33ku。纯化蛋白并对蛋白进行酶活性检测,结果显示该酶在体外具有与阳性对照醛缩酶相同的催化功能。用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,提取鸡毒支原体膜蛋白,Western-blot分析结果显示FBA多抗可与疏水性膜蛋白特异性结合,说明FBA位于鸡毒支原体膜表面。

主 题 词：鸡毒支原体 醛缩酶 原核表达 酶活性 膜定位 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2013.01.003

馆 藏 号：203827123...