细胞色素氧化酶2E1基因沉默对三氯乙烯致L02肝细胞毒性的影响

作     者：徐新云 毛吉炎 毛侃琅 刘国红 慈捷元 杨细飞 吴德生 黄海燕 张然 黄新凤 XU Xin-yun;MAO Ji-yan;MAO Kan-lang;LIU Guo-hong;CI Jie-yuan;YANG Xi-fei;WU De-sheng

作者机构：深圳市疾病预防控制中心卫生毒理学重点实验室深圳市现代毒理学重点实验室518055 

基　　金：深圳市科技计划重点项目(201101015) 

出 版 物：《中华劳动卫生职业病杂志》 (Chinese Journal of Industrial Hygiene and Occupational Diseases)

年 卷 期：2013年第31卷第3期

页      码：172-177页

摘      要：目的通过RNA干扰技术，构建细胞色素氧化酶（CYP）2E1基因慢病毒表达载体，研究CYP2E1基因沉默对三氯乙烯（TCE）致肝细胞毒性的影响。方法设计合成shRNA片段连接到慢病毒载体，筛选单菌落，经聚合酶链式反应（PCR）和测序鉴定后提取质粒，转导L02肝细胞中，筛选CYP2E1缺陷型细胞，利用荧光定量PCR和免疫蛋白印迹法（Westernblot）鉴定干扰效果。以不同浓度（0、0．25、0．50、1．00、2．00、4．00mmol/L）TCE分别对L02肝细胞和CYP2E1基因沉默细胞染毒，测定TCE对2种细胞的存活率及IC50，应用流式细胞仪测定细胞凋亡率，采用实时荧光定量PCR检测细胞凋亡基因和癌基因mRNA表达水平。结果正常L02肝细胞对TCE的IC50为15．1mmol／L，CYP2E1沉默细胞对TCE的IC50为23．6mmol／L。随TCE剂量增加两组细胞凋亡率升高，2．0、4．0mmol／LTCE染毒剂量时，CYP2E1沉默细胞的凋亡率明显低于L02肝细胞组，差异有统计学意义（P〈O．05或P〈0．01）。TCE染毒后CYP2E1沉默细胞的抗凋亡基因Bcl-2表达水平比L02肝细胞升高15％-60％，凋亡基因caspase-3和caspase-9表达水平比L02肝细胞下降30％-60％，差异均有统计学意义（尸〈O．01）。抑癌基因p53表达水平明显高于L02肝细胞，升高81％-278％；癌基因***和k-ras明显低于L02肝细胞组，下降20％～68％，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论利用慢病毒介导RNA干扰技术成功构建了CYP2E1基因沉默细胞。沉默CYP2E1基因可降低TCE对肝细胞毒性，抑制部分凋亡基因与癌基因表达，提示CYP2E1基因在三氯乙烯代谢过程中发挥重要作用，与三氯乙烯毒性存在一定关系。

主 题 词：三氯乙烯 细胞色素氧化酶2E1 RNA干扰 慢病毒载体 基因沉默 

学科分类：1007[医学-药学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1001-9391.2013.03.003

馆 藏 号：203827186...