表达番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体的构建

作     者：李林林 孙敏华 董嘉文 向蓉 袁建丰 邝瑞欢 胡奇林 张建峰 

作者机构：广东省农科院动物卫生研究所/广东省兽医公共卫生公共实验室/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东广州510640 

基　　金：广东省自然科学基金博士启动项目(S2011040001867) 广东省农业科学院院长基金(201412) 国家公益性行业(农业)科研专项(201003012) 广东省科技计划项目-省国际合作项目(2011B050700007) 

出 版 物：《广东农业科学》 (Guangdong Agricultural Sciences)

年 卷 期：2015年第42卷第3期

页      码：134-139,F0003页

摘      要：根据Genbank上痘病毒TK基因序列分别设计左右同源臂引物TKL-F/R和TKR-F/R,以FPV基因组为模板,扩增左右同源重组臂(TKL、TKR);PCR连接左右同源臂,使中间带有多酶切位点MCS,然后连入pBluescriptIISK(+)骨架质粒,获得的阳性质粒命名为pTK;合成反向串联表达盒:p7.5-MCS1-SV40-MCS2-P11,将表达盒插入质粒pTK的MCS位点,筛选获得阳性质粒pTKS;在鸡痘病毒早期启动子P7.5后的MCS1处插入MDPVVP3基因,晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFPBGHpA,从而构建MDPVVP3基因重组鸡痘病毒转移载体pTKS-VP3-EGFP,对构建好的转移载体进行酶切和测序鉴定。将转移载体pTKS-VP3-EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)后,经RT-PCR和绿色荧光蛋白基因表达鉴定了MDPVVP3基因的表达,为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。

主 题 词：番鸭细小病毒 VP3基因 重组鸡痘病毒 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-874X.2015.03.029

馆 藏 号：203832898...