重组人骨形态发生蛋白2在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

作     者：孙传秀 赵文志 何盛为 方旭 米立东 杜广宇 张路 Sun Chuan-xiu;Zhao Wen-zhi;He Sheng-wei;Fang Xu;Mi Li-dong;Du Guang-yu;Zhang Lu

作者机构：大连医科大学附属第二医院北院骨外科辽宁省大连市116031 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2009年第13卷第7期

页      码：1267-1270页

摘      要：背景:骨形态发生蛋白是一类调节骨组织发育的生长因子,其中骨形态发生蛋白2诱骨活性最强,在骨组织工程研究中需要大量的骨形态发生蛋白2。目的:克隆表达骨形态发生蛋白2基因,并进行蛋白表达及蛋白纯化定量。设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-05/07在宝生物工程(大连)有限公司开放实验室完成。材料:表达载体pET28aVector及相应的宿主细胞***21(DE3)购于Novagen公司;分子伴侣质粒pTF16、pGro7、pKJE7购于宝生物工程(大连)有限公司。方法:利用基因重组技术,优化并人工合成骨形态发生蛋白2基因,亚克隆至含T7启动子的原核表达载体pET28a中,构建表达载体pET-BMP。将重组质粒pET-BMP与3种含分子伴侣质粒共转入宿主菌***21(DE3)中,用IPTG进行诱导表达。菌体经超声波破碎,镍柱亲和层析纯化并定量。主要观察指标:①3种表达质粒的表达及可溶性检测及表达上清的westernblotting检测。②pET-BMPg的纯化。结果:在表达宿主菌中,骨形态发生蛋白2基因获得了高效表达,其中一组为可溶性表达,表达产物经亲和层析纯化后,可溶性表达量达12.18mg/L培养基。结论:人骨形态发生蛋白2基因能在pET表达系统中得到高效可溶性表达。

主 题 词：骨形态发生蛋白2 基因表达 组织构建 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 0403[0403] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 1010[医学-医学技术类] 100101[100101] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 10[医学] 

馆 藏 号：203840658...