以siRNA表达载体稳定抑制缝隙连接蛋白43表达的睾丸间质细胞和睾丸支持细胞系的建立

作     者：郑素平 洪晓婷 王琴 陶亮 ZHENG Su-ping;HONG Xiao-ting;WANG Qin;TAO Liang

作者机构：中山大学中山医学院药理学教研室广东广州510080 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No30973434) 国家新药创制重大专项"十一五"课题(No2009zx09303-007) 

出 版 物：《中国药理学通报》 (Chinese Pharmacological Bulletin)

年 卷 期：2010年第26卷第10期

页      码：1285-1289页

摘      要：目的构建Cx43-siRNA真核表达载体,获得连接蛋白43(connexin43,Cx43)被长期稳定抑制的睾丸间质细胞(TM3细胞)系和睾丸支持细胞(TM4细胞)系,为研究Cx43及其形成的细胞缝隙连接(gap junction,GJ)在睾丸组织中的作用提供有用模型。方法设计合成3对针对Cx43的短发夹样siRNA的DNA模板序列,定向连接到siRNA真核表达载体pSilencerTM2.1-U6neo上,通过测序鉴定后以脂质体法瞬时转染睾丸支持细胞,以Western blot方法检测Cx43蛋白表达水平,筛选出最有效的干扰序列,再将之分别转染睾丸间质细胞和睾丸支持细胞,G418筛选出能稳定表达siRNA的细胞系,以"Parachute"荧光传递示踪法检测细胞缝隙连接功能。结果 Western blot结果显示,第3对干扰序列对Cx43表达抑制效果最佳,以表达该序列的质粒稳定转染的TM3细胞和TM4细胞上Cx43蛋白表达水平均明显降低;荧光传递示踪法检测表明,两种细胞系的GJ功能均被明显抑制。结论以Cx43-siRNA真核表达载体稳定转染的方法能长期干扰TM3和TM4细胞上Cx43的表达,并抑制由其形成的GJ功能。

主 题 词：缝隙连接 连接蛋白43 RNA干扰 稳定转染 睾丸间质细胞 睾丸支持细胞 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100101[100101] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203841460...