短C肽门冬胰岛素制备工艺的研究

作     者：付志成 马妍 张增涛 刘日勇 何勇 范开 FU Zhi-cheng;MA Yan;ZGANG Zeng-tao;LIU Ri-yong;GE Yong;FAN Kai

作者机构：重庆理工大学重庆400054 富进生物医药有限公司重庆400041 

出 版 物：《重庆理工大学学报（自然科学）》 (Journal of Chongqing University of Technology：Natural Science)

年 卷 期：2015年第29卷第4期

页      码：60-66页

摘      要：为研究门冬胰岛素制备工艺,参照毕赤酵母偏好密码子,设计合成N-端连接引导肽EEAEAEAEPK,以KEWK作为短C肽,A、B链结构完整的门冬胰岛素c DNA序列。利用Xho I-Not I酶切位点将其插入表达质粒p PICZαA,采用电转移方法将重组质粒转入毕赤酵母x-33,筛选高拷贝重组子作为工程菌株进行高密度发酵,表达量可达到0.57 g/L。发酵液经金属螯合层析和SP阳离子层析纯化后鉴定正确。建立CPB/Trypsin双酶切工艺,对不同温度及p H条件下产生的酶切产物进行分析,初步建立了酶切最佳p H值和温度条件。酶切产物经纯化后制得纯度为91.7%的门冬胰岛素,副产物为B链30位缺失的门冬胰岛素。该设计方法为含短C肽EWK门冬胰岛素制备中选用Lys-c酶切成本过高的问题提供了备选解决方案。

主 题 词：门冬胰岛素 毕赤酵母 短C肽 纯化 

学科分类：1007[医学-药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-8425(z).2015.04.012

馆 藏 号：203847954...