荧光mRNA差异显示方法的建立及条件优化

作     者：余桂华 陈如凯 陈燕凌 

作者机构：福建医科大学附属协和医院肝胆外科350001 福建农林大学农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点开放实验室350001 

基　　金：福建省科委资助项目项目号 2 0 0 1 Z0 32 

出 版 物：《福建医药杂志》 (Fujian Medical Journal)

年 卷 期：2004年第26卷第3期

页      码：135-137页

摘      要：目的　建立荧光 m RNA差异显示方法 ,优化实验条件 ,为分离克隆基因差异表达片段奠定基础。方法　提取总 RNA,筛选随机引物和荧光锚定引物各 1条进行差异显示 ,割取差异条带进行重扩增。结果　总 RNA经DNase 处理后 ,展示条带减少明显 ,以未经处理为好 ;提高反转录的温度有利于长片段 c DNA的合成 ;荧光标记锚定引物、长引物设计和采用高分辨率的电泳系统有利于最大限度的减少 DD- PCR中的假阳性率偏高的问题。结论　 DD- PCR方法简便、灵敏、高效 ,完全适用于一般性的基因差异表达研究。

主 题 词：差异显示 荧光标记 基因扩增 基因 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-2600.2004.03.100

馆 藏 号：203854577...