不同甲基化检测技术对模拟肺癌患者血浆中APC基因甲基化的检测

作     者：张丽霞 潘世扬 谢而付 陈丹 高丽 黄珮珺 杨迪 张寄南 ZHANG Lixia;PAN Shiyang;XIE Erfu;CHEN Dan;GAO Li;HUANG Peijun;YANG Di;ZHANG Jinan

作者机构：南京医科大学第一附属医院临床检验中心南京210029 江苏省生物诊断与治疗重点实验室南京210029 

基　　金：江苏省135重点实验室项目(SK200205) 江苏省卫生厅面上项目(Z200601) 江苏省科技基础设施建设计划(BM2006113) 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2007年第25卷第3期

页      码：199-201页

摘      要：目的研究模拟肺癌患者血浆DNA中APC基因甲基化最低检测限,确定不同甲基化检测技术在早期肺癌诊断中的价值。方法用普通甲基化特异性基因扩增(methylation specific PCR,MSP)方法检测肺癌细胞株NCI-H460细胞APC基因,以酚-氯仿经典方法提取NCI-H460细胞DNA,紫外分光光度计定量并以10倍稀释的浓度梯度依次投入相同的健康人血浆200μl中去,得到模拟肺癌患者血浆,利用磁珠核酸提取方法从模拟血浆样本中提取血浆DNA。对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以Sybr-GreenⅠ为染料进行实时荧光定量MSP检测,同时进行普通MSP检测。结果NCI-H460细胞中的APC基因启动子1A区719位点存在甲基化,实时荧光定量MSP检测模拟肺癌患者血浆APC基因甲基化的最低检测限为在200μl血浆中能检测出102个肿瘤细胞的DNA,而以普通MSP检测,200μl血浆中需投入103个以上肿瘤细胞的DNA才有弱阳性条带。实时荧光定量MSP检测技术比普通MSP检测的敏感性至少高出10倍。结论实时荧光定量MSP比普通MSP检测灵敏度高,该技术用于肺癌患者血浆DNA甲基化检测,可能有助于肺癌早期诊断。

主 题 词：肺癌 血浆DNA 结肠多发性腺瘤样息肉(APC) 甲基化 实时荧光定量甲基化特异性聚合酶链反应 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-764X.2007.03.015

馆 藏 号：203855555...